Análise Teórica Comparativa de CLC X CLAE

Comparação teórica de Cromatografia líquida clássica (CLC) x Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE)

Theoretical Comparison of Classical liquid chromatography (CLC) x High performance liquid chromatography (HPLC)

Na Cromatografia Líquida Clássica (CLC):

      O recheio da coluna é utilizado geralmente uma só vez, porque parte da amostra usualmente se adsorve de forma irreversível. O enchimento da coluna deve ser repetido para cada separação. A aplicação da amostra, para ser feita corretamente, requer alguma habilidade, fatos que representam um desperdício de material e tempo. A vazão de eluente na CLC é promovida pela ação da gravidade e as frações individuais da amostra são coletadas manualmente ou através de um coletor de frações. As separações requerem, geralmente, várias horas e a detecção e a quantificação das frações são realizadas por análise manual.

 Na CLAE:  

          Emprega-se um coluna fechada, reaproveitável; portanto, até centenas de separações individuais podem ser realizadas com a mesma coluna. Essas colunas são muito eficazes, mas oferecem uma grande resistência à vazão da fase móvel, ou seja, ela sofre uma perda de carga. Por esta razão é necessário empregar sistemas de bomba de alta pressão (até 400 bars) que fazem a fase móvel migrar a uma velocidade razoável através da coluna. A vazão da fase móvel é controlada facilmente, resultando em operações mais reprodutíveis, que tornam as análises executadas por CLAE mais precisas. Vários tipos de detectores, que podem ser colocados na saída da coluna, proporcionam uma identificação e quantificação continua dos componentes da amostra. A análise quantitativa pela CLAE pode atingir uma precisão superior a + 0.5%. Finalmente, separações em escala preparativa de miligramas de amostras são relativamente fáceis.

Fonte: Cromatografia Líquida de Alta Eficiência - Disponível em:< http://www.ebah.com.br/content/ABAAAeqmMAH/clae-cromatografia-liquida-alta-eficiencia>. Acesso em: 21 maio 2014.

Postado por Sterffson Jota

Tipos de Interações entre Moléculas do Solvente e Analito.

POLARIDADE DA FASE MÓVEL

 Quatro tipos de interações entre moléculas do solvente e analito devem ser consideradas:

 Types of interactions between molecules of the solvent and analyte.

a) Dispersão: As interações de dispersão ocorrem porque os elétrons estão em movimento caótico e em certos momentos podem assumir uma configuração assimétrica. Em um determinado instante pode-se criar um momento dipolar temporário numa molécula, polarizando os elétrons de um lado de uma molécula adjacente, repelindo-os consequentemente. Esse dipolo resultante acarretará numa atração eletrostática dessas moléculas. As interações de dispersão são maiores para as moléculas mais fáceis de polarizar. 

b) Interação dielétrica: É a interação dos íons da amostra com os líquidos de alta constante dielétrica. A carga polariza as moléculas do solvente que as rodeia, resultando numa atração eletrostática da substância com o solvente. Ela facilita a dissolução de substâncias iônicas e ionizáveis da amostra em fases polares como a água, metanol, etc.

c) Dipolos: Ocorrem quando existem moléculas de solventes e analitos que têm dipolos permanentes. Ocorrem geralmente entre grupos funcionais das próprias moléculas.

Fonte: CIOLA, R., Fundamentos da Cromatografia a Líquido de Alto Desempenho, , ed. Edgard Blücher Ltda., São Paulo, 1998

Postado por Ana Brígida

Método Analítico Por CLAE Em Comprimidos de Benznidazol.

    

DEVELOPMENT OF AN HPLC ANALYTICAL METHOD FOR BENZNIDAZOL TABLETS

      

       O trabalho pelo qual a pesquisa foi extraída, "tem como objetivo o desenvolvimento e validação de método analítico para doseamento de comprimidos à base de benznidazol, de acordo com a RE 899 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA)".

         A amostra de comprimidos testada foi diluída em metanol Merck® até uma concentração final de 40 mg L-1, sendo a varredura programada em uma faixa entre 200 a 800 nm, objetivando em confirmar o comprimento de absorvância máximo citado pela literatura. Visando redução de custo e de tempo de análise, realizou-se estudo em Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE).

         As amostras foram preparadas com a primeira diluição em acetonitrila, o que se justifica pela hidrofobicidade do ativo e a segunda diluição em fase móvel, opção testada visando a redução de custo para a análise. O cromatograma obtido registrou o pico desta análise simétrico, que se apresenta com tempo de retenção curto, excelente para rotina industrial, agilizando a liberação do produto, principalmente durante o processo de fabricação. 

A partir do trabalho realizado tem-se que, pelos resultados apresentados, o método desenvolvido apresenta-se validado conforme a RE nº 899 da ANVISA, estando disponível como método específico, preciso, exato e robusto para acompanhamento do estudo de estabilidade nos moldes acelerado e de longa duração dos comprimidos de benznidazol 100 mg, desenvolvidos pelo LAFEPE® em parceria com a Roche®. Este medicamento é hoje considerado a única alternativa mundial para o tratamento de pacientes crônicos com doença de Chagas.

Fonte: SILVA; A. L. M.; et al.Desenvolvimento De Método Analítico Por CLAE  Em Comprimidos De Benznidazol Para A Doença De Chagas. Quim. Nova, Vol. 30, No. 5, 1163-1166, 2007. Disponível em: <http://www.scielo.br/pdf/qn/v30n5/a21v30n5.pdf> Acessado em: 20 abr. 2014

Postado por: Ana Brígida

Determinação De Lamivudina, Estavudina E Nevirapina, Em Comprimidos, Por Cromatografia Líquida De Alta Eficiência

Determination Of Lamivudine, Stavudine And Nevirapine In Tablets By High Performance Liquid Chromatography

    A estavudina (d4T) e a lamivudina (3TC), fármacos ITRN, são, preferencialmente, recomendados para comporem a terapia anti-retroviral. Um dos principais motivos que levam à diminuição da adesão ao tratamento, pelos pacientes portadores do HIV, é a alta complexidade do regime terapêutico, com a administração diária de grande número de comprimidos e cápsulas, utilizados por tempo indeterminado. 

      Foi utilizado o cromatógrafo a líquido de alta eficiência HP 1100, equipado com bomba quaternária,  forno de coluna, auto-injetor HP 1100, detector UV-Vis DAD HP 1100. Os dados cromatográficos foram analisados usando-se o programa HP ChemStation. As soluções utilizadas foram: Solução padrão estoque, Solução padrão diluída, Solução amostra e Solução placebo.

Na Figura 2 está apresentado o cromatograma obtido com as condições estabelecidas. Observou-se a completa separação entre 3TC, d4T e NVP, mesmo na presença dos excipientes do placebo. O cromatograma do placebo apresentou picos com tempo de retenção próximos de 2,5 min, mas com intensidades muito baixas, não constituindo interferência em potencial. 

       Calcularam-se os teores dos ARV nos comprimidos a cada parâmetro modificado. Estes teores  não apresentaram variações significativas em relação aos teores obtidos aplicando-se o métodonas condições estabelecidas.alcularam-se os valores de resolução, que foram superiores a 2, indicando adequada separação dos picos, e os valores de fator de cauda, que ficaram próximos da unidade, indicando simetria dos picos. Diante dos resultados obtidos, concluiu-se que o método é robusto. 

        Um método por cromatografia líquida de alta eficiência para determinação de lamivudina, estavudina e nevirapina, em comprimidos foi desenvolvido e validado. O método, em fase reversa e modo isocrático, demonstrou ser seletivo, linear, preciso, exato erobusto, além de simples e rápido, podendo ser aplicado a análises rotineiras de controle de qualidade.

Referência: SILVA, G. R.; et al. Determinação De Lamivudina, Estavudina E Nevirapina, Em Comprimidos, Por Cromatografia Líquida De Alta Eficiência. Quim. Nova,Vol. 29, No. 6, 1159-1163, 2006.  Disponível em: <http://www.scielo.br/pdf/qn/v29n6/01.pdf>. Acesso em: 15 abr. 2014

Postado por Sterffson Jota

CARACTERÍSTICAS DAS FASES ESTACIONÁRIAS EM CLAE

                      CARACTERÍSTICAS DAS FASES ESTACIONÁRIAS EM CLAE / CHARACTERISTICS OF STATIONARY PHASES IN HPLC

Considerando as suas propriedades físicas, os recheios para CLAE podem ser classificados de acordo com os seguintes aspectos:

a) Sólidos rígidos, semi-rígidos ou não rígidos;
b) Partículas porosas ou peliculares;
c) Partículas esféricas ou irregulares;
d) Partículas com diferentes diâmetros.

Sólidos rígidos a base de sílica são os recheios mais usados atualmente. Esses recheios podem resistir a pressões relativamente altas, resultando em enchimento estável e colunas eficientes de partículas pequenas.

Sólidos semi-rígidos são geralmente constituídos de partículas porosas de poliestireno entrecruzadas com divinilbenzeno. 0 semi-rígido tem sido usado para pressões até 350 bars. O maior interesse no semi-rígido atualmente é para aplicações na CLAE por exclusão com fase móvel orgânica; contudo eles também são usados na troca iônica.

 Sólidos não rígidos, tais como agarose ou dextrose, usados em cromatografia por exclusão, são aplicados exclusivamente para a separação de moléculas grandes, solúveis em água, como as proteínas. Contudo, estes sólidos não rígidos não podem resistir as pressões usadas na CLAE. Ambos podem ser introduzidos na coluna com certa facilidade, obtendo-se colunas muito eficazes. Elas podem ser utilizadas em cromatografia líquido-sólido, dependendo da atividade da sua superfície ou pode ser recoberto com alguma fase líquida e obter-se uma coluna para CLAE com fase quimicamente ligada.

Postado por Sterffson Jota

Forças elementares envolvidas na CLAE/ Elemental forces involved in HPLC

 A Cromatografia Líquida de Alta Eficiência tem a capacidade de realizar separações e análises quantitativas de uma grande quantidade de  compostos presentes em vários tipos de amostras, em escala de tempo de poucos minutos, com alta resolução, eficiência e sensibilidade.

Fonte: http://www.ebah.com.br/content/ABAAABds4AA/acido-hipurico-na-urina

0 processo cromatográfico consiste na partição dos componentes de uma mistura entre a fase móvel e a fase estacionária. Na cromatografia líquida a fase estacionária é constituída de partículas sólidas empacotadas em uma coluna, a qual é atravessada pela fase móvel. São as forças físicas e químicas que atuam entre os solutos e as duas fases são responsáveis pela retenção dos solutos sobre a coluna cromatográfica. 

As forças elementares que agem sobre as moléculas são de cinco tipos:

•  Forças de dispersão de London ou forças de Van der Waals;
• Interações de dipolo induzido;
•  Ligações de hidrogênio;
• Interações dielétricas;
• Interações eletrostáticas e coulombianas.

Fonte: CEFET-QUÍMICA - Unidade Rio de Janeiro <http://www.ifrj.edu.br/webfm_send/546> Acesso em: 21 de março de 2014

Postado por Sterffson Jota